用姜黄提取物。种天中种精确称取0.4~0.59姜黄素样品(精确至0.000lg)于10mL试管中,然植用5mL丙酮溶液涡旋提取2min后,物提用1mL移液枪将上清液转移至100mL圆底烧瓶中,取物再用5mL丙酮涡旋提取1min,多环的用1mL移液枪将上清液转移至100mL圆底烧瓶中,芳烃方法旋转蒸发仪浓缩至尽干,测定氮气吹干,种天中种3mL正己烷和0.5mL丙酮溶解,然植样品液待净化。物提依次用5mL二氯甲烷、取物5mL正己烷活化SPE小柱;将待净化液加入SPE小柱,多环的再用2mL正己烷荡洗圆底烧瓶后继续加入;用3mL正己烷淋洗,芳烃方法待淋洗液流完之后继续加人3mL正己烷淋洗;用10mL二氯甲烷洗脱。测定收集洗脱液,种天中种旋转蒸发仪浓缩至近干,氮气吹干,用2mL 88%乙腈水溶液准确定容,超声溶解,样品液使用一次性注射器过0.22μm滤膜,装小瓶进样检测。样品液装小瓶后进行色谱检测,计算加标回收率,结果见表4。在3个添加水平下,万寿菊提取物在加标回收率在62.15%~100.12%之间I番茄菊提取物在加标回收率在62.50%~80.12%之间;葡萄籽提取物在加标回收率在99.27%~106.87%之间l绿咖啡豆提取物在加标回收率在65.88%~80.49%之间;姜黄提取物在加标回收率在75.54%~88.15%之间。
5、精密度验证
取万寿菊提取物、番茄提取物、葡萄籽提取物、绿咖啡豆提取物和姜黄提取物样品各1批,收集液使用旋转蒸发仪浓缩至近干,氮气吹干,用2mL 88%乙腈水溶液准确定容,超声溶解,样品液使用一次性注射器过0.22μm滤膜,装小瓶进样检测。收集液使用旋转蒸发仪浓缩至尽干,氮气吹干,用2mL 88%乙腈水溶液准确定容,超声溶解,样品液使用一次性注射器过0.22μm滤膜,装小瓶进样检测。绿咖啡豆提取物用移液枪将上层正己烷转移至圆底烧瓶中,葡萄籽提取物用60℃~80℃水浴加热溶液,使正己烷层溶解,再用移液枪将上层正己烷转移至圆底烧瓶中,用正己烷重复萃取1次,合并正己烷溶液。氮气将正己烷吹干,用2mL88%乙腈水溶液准确定容,超声溶解,样品液使用一次性注射器过0.22μm滤膜,装小瓶进样检测。依次用5mL二氯甲烷、5mL正己烷活化SPE小柱;将待净化液加入SPE小柱,再用2mL正己烷荡洗圆底烧瓶后继续加入;用3mL正己烷淋洗,待淋洗液流完之后继续加人3mL正己烷淋洗;用10mL二氯甲烷洗脱。收集洗脱液,旋转蒸发仪浓缩至近干,氮气吹干,用2mL 88%乙腈水溶液准确定容,超声溶解,样品液使用一次性注射器过0.22μm滤膜,装小瓶进样检测。在1.3条件下进行色谱分析,每批样品一天之内连续测定5次并连续测定5 d,计算方法的日内、日间精密度,结果见表5。方法检测万寿菊提取物样品日内相对标准偏差在11.23%~14.26%之间,日间相对标准偏差在16.83%~18+26%之间;检测番茄提取物样品日内相对标准偏差在11.73%~17.03%之间,日间相对标准偏差在17.05%~19.56%之间;检测葡萄籽提取物样品日内相对标准偏差在1.21%~3.80%之间,日间相对标准偏差在3.83%~7.55%之间;检测绿咖啡豆提取物样品日内相对标准偏差在1.59%~5.41%之间,日间相对标准偏差在6.36%~11.29%之间;检测姜黄提取物样品日内相对标准偏差在4+51%~16.83%之间,日间相对标准偏差在10.40%~19.48%之间。
三、结论
通过对实验中所用试剂、器具及玻璃器具清洗方式进行系统排查与验证,排除了污染空白试样的因素,确定了试验用试剂、器具及玻璃器具的清洗方式。同时根据5种天然植物提取物的不同性质,优化和验证不同的净化方法,针对5种天然植物提取物分别建立了不同的前处理方法。并按照确定的色谱条件和前处理方法,研究方法的线性范围、检出限、定量限、准确度和精密度等技术指标。实验结果表明:4种多环芳烃在0.0l~8.0pg/l(g范围内呈良好线性关系,相关系数R2为1.0000,仪器检出限为0.01μg/kg,定量限为0.04μg/kg,相对标准偏在20%以内,加标回收率在60%~110%之间。该方法适用性强,检测准确度高,实现了5种天然植物提取物中4种多环芳烃的检测。
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